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分子poct的顛覆性變革,這兩項技術突然火了!
發布時間:2023-10-13 09:08:42
POC

POC(Point-of-Care)又稱即時檢測,是IVD行業的一個細分領域,指在采樣現場進行的、利用便攜式分析儀器及配套試劑快速得到檢測結果的一種檢測方式。

POCT技術最早始于20世紀中期,由Edmonds以干化學制片測量血糖及尿糖,隨后由Ames公司將其檢測項目擴大并商業化。由于方法簡便快速而得到普遍應用。近20年來,POC檢測的發展在全球范圍內是肉眼可見的速度在突飛猛進。

中國自2015年POCT第一股上市開始,以每年超過20%的速度快速增長,預計2027年整體市場超過260億元,遠超全球POCT行業7.4%的發展速度,已經是我國IVD行業增長最快的細分領域之一。

來源:前瞻產業研究院

為了更好的理解POC檢測,為其技術的發展指明方向,已有幾個標準來評估POC檢測的適用性。其中包括WHO的ASSURED標準,FDA的CLIA標準,以及在新冠之后提出的STARLITE標準。

來源:https://doi.org/10.3390/ijms232214110

分子POCT

在新冠疫情期間,POCT通過實際場景的應用自證了其技術的成熟性和可靠性,尤其是分子POCT檢測技術的廣泛運用。

等溫擴增(如HCA、MDA、NASBA和LAMP等)在分子POC診斷中發揮了越來越重要的作用。等溫擴增具有與qPCR相似的靈敏度和特異性,但是在快速、低成本和便攜性方面具有優勢,因此成為在資源有限環境下使用POC檢測的理想選擇。

近幾年來,等溫擴增技術的進步,尤其是在實時檢測、多重擴增和基于芯片的檢測方面的發展,提高了等溫擴增的靈敏度和準確性,可以說是徹底改變了POC行業,為更快、更方便的診斷鋪平了道路。

LAMP

在多種等溫擴增技術中,LAMP是最常用的方法,它可實現在恒定溫度(60-65oC)下對DNA或RNA靶標進行高效、特異和快速擴增。在相同時間內,LAMP擴增 效率比傳統 PCR高100倍。不過,LAMP技術也有一些限制,例如具有較高假陽性率,引物設計復雜、重復性不太好。

NASBA

另一種等溫擴增技術,基于核酸序列的擴增(Nucleic acid sequence based amplification,NASBA)也越來越受歡迎,它的核心優勢是能在更低的溫度下(~41°C)下直接擴增RNA,只需要使用2個特異性引物P1/2,因此在引物設計方面就沒那么復雜,更容易優化。

與使用Bst酶鏈置換活性的LAMP擴增不同,NASBA擴增是依賴AMV逆轉錄酶、RNase H和噬菌體T7 RNA聚合酶活性進行的反應。

其兩個特異性引物與目標RNA序列雜交,并通過逆轉錄酶生成DNA的互補鏈(cDNA),然后將其作為模板合成多個RNA副本。新的RNA鏈和cDNA模板通過變性和再變性分離并重新連接。這一過程在反轉錄(產生更多的cDNA)、RNA合成和指數級RNA擴增的循環中重復進行,可在90分鐘內將目標片段擴增1012倍以上。

NASBA反應的反轉錄過程被直接合并到擴增反應中,因此該技術最適合分析RNA樣品。樣品中DNA、肝素、檸檬酸鹽、血紅蛋白、白蛋白和脂質等的污染將不會對結果造成影響,因而適用于可能不適合其他試驗檢測的樣品。且反應溫度較低,因此是細菌、病毒等多種病原微生物POC診斷的理想選擇。

(文章來源于互聯網)

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